人胚胎干細胞 hES實驗方法與知識匯總
造血干細胞研究工具
MSC細胞研究完整解決方案
血液細胞分類和細胞生物標記
Stem cell markers
小鼠造血干細胞的表面標記以及三種不同流式分選分析方法:LSK, SLAM, ESLAM。
小鼠造血干細胞長周期培養系統(LTC)可以用于檢測和計數原始造血祖細胞。在該培養系統中,如果提供適當的培養基、培養添加物以及適當的培養條件,原始造血細胞與粘附的基質細胞共培養則可以持續數周產生髓系克隆祖細胞和成熟粒細胞以及巨噬細胞。LTC培養系統也一直被用于淋巴細胞的產生和定量研究。
造血細胞CFU集落檢測是目前體外檢測造血干/祖細胞功能的金標準。CFU檢測通常是將造血細胞以一定的密度接種于添加了適當細胞因子的半固體培養基(如:甲基纖維素半固體培養基(MethoCult?))中。相比于瓊脂,在低溫條件下,甲基纖維素的粘稠度更容易控制,加入的細胞因子活性更穩定,更適合于集落的形成和生長。
人HSPCs中最被熟知的標志物是細胞表面糖蛋白CD34。該標志物可用于從骨髓和血液中鑒定和分離HSPCs,因為它在大多數(非全部)人HSPCs上高表達,但不表達于成熟血細胞。CD34+細胞不表達成熟血細胞具有的所謂的譜系(Lin)標志物,例如CD2、CD3、CD11b、CD11c、CD14、CD16、CD19、CD24、CD56、CD66b和CD235。而一些標志物在CD34+細胞群上的表達具有異質性,例如CD38、CD45RA、CD90和CD49f。
PDX模型人源腫瘤組織周邊會混和著不同程度鼠源的間質細胞 (stroma cells) 、周細胞 (pericyte)、甚至有血管增生。這些浸潤混合的鼠源” 污染細胞” 對人源腫瘤組織產生更多非必要的異質性,進而造成實驗結果偏差。因此,如何有效地從異種移植腫瘤中去除小鼠細胞是PDX 模型下游分析或培養應用的重大環節。
人CFU檢測的計數
CFU檢測的建立
手動細胞計數
使用StemSpan?白血病細胞培養試劑盒進行體外藥物篩選
小鼠造血集落檢測
構建腫瘤微環境 (tumour microenvironment, TME)是研究腫瘤異質性、癌癥進展與后續轉移、藥物反應和耐藥的理想研究模型。目前已有人源腫瘤組織來源移植瘤模型(patient-derived xenografts, PDX)和腫瘤類器官(Patients derived organoids,PDO) 兩種有效的研究模型。
腫瘤細胞分選,腫瘤干細胞培養等
內皮細胞,內皮祖細胞,基質細胞的信號聯系在血管形成的時候是至關重要的。其中,外泌體就是其中一種通信方式。有研究發現,外泌體在免疫應答,腫瘤存活,應激反應和血管生成上的細胞間通信有著非常重要的作用。在外泌體中有mRNA和miRNA往往會對受體細胞產生影響。
小鼠 內皮細胞 markers
人 內皮細胞 markers
MSC標志物PCR鑒定
己亥歲尾,“新冠SARS-Cov2”席卷中國大地,由該病毒引起的肺炎更是讓人們聞之色變。疫情爆發以來,關于間充質干細胞(MSC)能治療新冠引起的重癥肺炎的官方發文和報道有很多,干細胞治療再次成為熱點。本文整理了MSC研究完整解決方案,希望對您的科研工作有所幫助。另外,疫情還在蔓延,大家切勿麻痹大意。唯愿眾志成城,抗擊疫情。
MSC具有調節免疫應答的能力,大大增加MSC在治療應用中的價值。MSC可以根據微環境,通過抑制T細胞、B細胞、DC細胞、NK細胞,從而釋放抑制因子、刺激因子或表達其它表面分子來發揮其免疫調節功能。研究人員還發現,無血清條件下培養的MSC比傳統的含血清培養基培養的MSC對免疫細胞的免疫抑制作用更大。
在臨床轉化醫學研究上,MSCs被用于治療肝硬化、脊髓損傷、肌萎縮側索硬化癥、修復創傷組織器官、調節免疫等。
間充質干細胞(MSCs)具有多向分化潛能、能支持造血和促進造血干細胞植入、調節免疫以及分離培養、操作簡便等特點,正日益受到再生醫學領域的關注。作為種子細胞, 在臨床上MSCs常被用于修復組織細胞和器官損傷等多種難治性疾??;作為免疫調節細胞,治療免疫排斥和自身免疫性疾病。
細胞樣本的制備
MethoCult?培養基的制備
STEMdiff?腦類器官試劑盒為無血清培養系統,設計用于從人胚胎干細胞(ES)和誘導多能干細胞(iPS)生成腦類器官,基于MA Lancaster和JA Knoblich8發表的配方研發。培養40天后,這些腦類器官具有層次分明的祖細胞群,并產生成熟神經元,與在早期發育中人腦皮質層的觀察結果相符。
無滋養層無血清的培養條件下,多能干細胞的需要有特殊的基質膠促進貼壁和生長?;|膠鋪的好壞對hPSC培養有很大的影響。
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用于鑒定干細胞的方法有多種:傳統AP 染色鑒定形態、核酸方法鑒定(qPCR 檢測基因表達、染色體核型分析、轉座因子分析、DNA 甲基化分析),還有基于抗體的蛋白鑒定方法(如免疫熒光、免疫印跡、流式細胞術等應用)。
在多能干細胞培養基中生長的hPSC,當集落變得較大、中心變得密集和明亮(對比其邊緣),而相鄰的集落開始融合時,這時可進行細胞傳代。
當細胞擴增到一定數量以后,建議將其凍存起來進行后續的研究。目前用的最多的凍存液為10%FBS+DMSO+培養基凍存,但是血清的存在可能會影響后期細胞的應用。本文采用無血清凍存液,分別采用團塊形式和單細胞形式進行hPSC的凍存。
類器官這項技術自問世起,就快速且廣泛的應用于多種方面,包括基礎研究、轉化醫學和工業。類器官相關的文獻也占據了各大高影響因子的期刊封面,更在2017年被Nature評為Method of the Year 2017。
腦類器官是源于人多能干細胞(hPSC)的三維體外培養系統,這些系統再現了發育中人類大腦的發育過程和組織。它們為人神經系統所特有的神經發育和疾病過程的研究提供了一個具生理相關性的體外模型。它們為人神經系統所特有的神經發育和疾病過程的研究提供了一個具生理相關性的體外模型。在研究人類大腦發育和神經系統疾病如自閉癥、精神分裂癥或由寨卡病毒感染而引起的腦缺陷,神經類器官發揮重要的作用。
?肝臟是一個重要的器官,參與廣泛的過程,如解毒,蛋白質合成,代謝和激素的產生。盡管在體內具有驚人的再生能力,但是在體外,肝細胞的擴增仍然是一個挑戰。肝上皮細胞作為器官的生長為研究人員提供了穩定的肝細胞群,可用于肝臟生物學、疾病建模和毒性篩選等多個領域的研究。
最近在分離上皮祖細胞和基質細胞以及確定對肺發育重要的生態因子上取得的進展,已經導致建立了一個體外的3D肺組織培養細胞。
胃類器官
類器官屬于三維(3D)細胞培養物,包含其代表器官的一些關鍵特性。此類體外培養系統包括一個自我更新干細胞群,可分化為多個器官器官特異性的細胞類型,與對應的器官擁有類似的空間組織并能夠重現對應器官的部分功能,從而提供一個高度生理相關系統.
Matrigel作為一種基質膠,經常被用于各種細胞的培養以及類器官的形成,但Matrigel種類繁多,如何正確選擇一款Matrigel是解決細胞餓殍用的關鍵一步。為了更有效地幫助大家了解Matrigel產品、改善產品選擇流程,同時解決可能出現的問題,本文特地整理了一系列常見問題解答(FAQ)。
還在為取材困難而無法建立疾病模型煩惱嗎?利用Episomal重編程系統可將10 mL外周血誘導生成無外源基因插入的hiPSCs,為您輕松建立理想的疾病模型.
MethoCult? 人集落形成單位(CFU)檢測 常見問題分析
CFU集落鑒定
CFU培養基的選擇
人胚胎干細胞(hESCs)具有在體外自我更新擴增和分化為多種類型細胞的潛能,可為再生醫學的替代療法提供充足的細胞來源。