惡性腫瘤是目前全世界的主要死亡原因之一,傳統的放療、化療等治療手段治療效果并不理想,后期復發率很高。 隨著生物技術的飛速發展以及科研人員對人體免疫系統認識的逐步深入,CAR-T細胞免疫療法作為治療惡性腫瘤的“第五大療法”應運而生。該療法沒有通常放、化療的毒副反應,也不會出現耐藥性。
血液細胞分類和細胞生物標記
小鼠的 CD8 T Cell Markers
小鼠 CD4 T Cell Markers
調節性T細胞(Regulatory T Cells, Tregs)是一類專職抑制免疫活性、維持機體免疫平衡的免疫細胞。雖然含量較低而且將Treg作為單獨一類T細胞開展研究直到90年代才開始,但Treg在免疫調節中的重要性不容忽視。除針對Treg開展的基礎研究,基于Treg的細胞治療方案應用于過度免疫激活引發的組織損傷、自身免疫疾病也正成為免疫細胞治療的熱點分支。
該應用方案中,利用PanT細胞分離試劑盒直接從人PBMC中分離出Pan T細胞,然后用人T細胞活化和擴增試劑盒進行活化和擴增。 流式細胞儀在不同時間點對T細胞純度、增殖和活化標記表達進行評估.
調節性T細胞(Treg)除了在外周血內存在,對免疫反應發揮抑制性調節作用之外,越來越多的研究表明,在如小腸、皮膚等多種組織內存在Treg (Tissue-resident Treg)。這些特定組織形成獨特的“功能微環境”,也為身處該環境的Treg帶來了組織標簽。
免疫耐受通過主導機制(Dominant Mechanism)和退行機制(Recessive Mechanism) 實現即時的機體免疫調制。退行機制是細胞自發性的過程,令能識別并對自身引起免疫響應的細胞去除或使其失去免疫功能(anergy),亦或增加細胞表面抑制性抗體提高其激活閾等途徑;主導機制,這是由特定細胞群體主動對免疫細胞激活、擴增和發揮功能進行積極抑制的過程,因此可對免疫反應的強度和持續性進行調控。
利用病毒表面蛋白抗原進行免疫細胞體外刺激并獲取、分析抗原特異T細胞將為該病毒對免疫調節的基礎研究和疫苗研發提供重要的實驗方法。
抗原特異性T細胞是研究免疫系統的獨特工具。一但經外來病原體或腫瘤侵入活化免疫系統,抗原特異性T細胞通過自身T細胞受體 識別腫瘤抗原,具有選擇性識別腫瘤抗原、分裂增殖和持續提供長期免疫保護的能力,在治療病毒感染疾病和惡性腫瘤方面具有許多潛在的益處;因此在腫瘤免疫治療與疫苗開發上為一重要的細胞研究方向。
病毒感染常是導致免疫缺陷患者致死或致殘的主要原因。動物實驗及臨床研究均已證實病毒特異性T細胞在控制病毒感染中的作用,因此在進行免疫重建及抗感染治療的研究中得到廣泛關注。
該應用方案描述了可靠和高效的小鼠TH細胞分化的完整工作流程,從單細胞制備開始,然后分離初始CD4T細胞并體外激活和分化,通過綜合細胞分析。
T細胞激活需要至少兩個信號才能完全激活。 第一種發生在抗原主要組織相容性復合體(MHC)與T細胞抗原特異性受體(TCR)結合之后,第二種發生在隨后的共刺激分子的結合之后。 最有效的T細胞共刺激劑是CD28。
調節性T細胞(Treg)經CD3\CD28\CD2刺激活化后能夠抑制應答細胞CD4+CD25-( Tresp)和CD8+ T細胞的活化和增殖。Treg一旦被活化,其免疫抑制作用即為非抗原特異性,并且這種免疫抑制性不具有MHC限制性,能夠抑制同種同型或同種異型CD4+CD25-(Tresp)和CD8+T細胞的活化、增殖。除此之外,Treg還能對NK細胞的增殖、細胞因子分泌、單核/巨噬細胞、樹突狀細胞、B 細胞等免疫活性細胞起到抑制作用。
10色T細胞亞群抗體檢測配色方案
T細胞產生IL-17(也稱為IL-17A)是防止某些病原體所必需的。2000年一片文獻研究表明IL-17A是由一群獨特的T輔助細胞產生的。隨后的研究明確了一群獨立于Th1或Th2細胞的獨特T細胞亞群,可在體外和體內分化成產生IL-17的細胞,由此建立Th17細胞作為獨特的T輔助細胞譜系。在功能上,Th17細胞通過介導嗜中性粒細胞和巨噬細胞向受感染組織的募集,在抗宿主細胞病原體的宿主防御中起作用。此外,Th17細胞的異常調節可能在多種炎癥和自身免疫病癥的發病機制中起重要作用。
人 CD4 T 細胞Markers
人 CD8 T Cell Markers
CD45 CD45RO CD45RA CD45.1 CD45.2 的區別以及功能應用
T 細胞分選
T細胞是來源于骨髓,在胸腺職工分化、發育成熟的一種淋巴細胞。
分離后的T細胞可通過CD3/CD28共刺激信號或者PHA和Con A進行激活。
免疫T細胞表達CD3 特異性蛋白,利用CD3抗體通過流式鑒定T細胞。
Treg細胞可以通過特異性標記CD4\CD25\CD127或者胞內轉錄因子FoxP3抗體(#17-4776-41)進行流式鑒定。由于FoxP3是胞內表達,因此檢測時,需要進行破膜處理。Foxp3 / Transcription Factor Staining Buffer Set(#00-5523-00)專利配方設計和優化,可使用抗體對轉錄因子和核蛋白(例如 FoxP3 和 Ki-67)以及細胞因子和趨化因子進行核內染色。
該應用方案中,利用Treg 擴增試劑盒,人,有效擴增 CD4+CD25+CD127dim/– Treg細胞分離試劑盒分離的Treg表達Foxp3。它包括一個Treg細胞完整的工作流程,描述從外周血單個核細胞(PBMCs)分離人Treg細胞,細胞體外擴增,以及隨后的流式細胞分析。